化學發光成像分析系統

2022-09-02 14:35:56    admin11719

導語：化學發光成像系統可幫助您輕松進行化學發光和熒光成像以及分析免疫印跡。
系統內置軟件和單機版分析軟件均可進行采集后的圖像分析。

Western Blot原理及步驟

Western Blot即蛋白質印跡法（免疫印跡試驗），是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。它是將電泳分離后的細胞或組織中蛋白質從凝膠轉移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，然后用特異性抗體檢測某特定抗原的一種蛋白質檢測技術，現已廣泛應用于基因在蛋白水平的表達研究、抗體活性檢測和疾病早期診斷等多個方面。

 

原理：

Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE（聚丙烯酰胺凝膠電泳）分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。

主要的單個過程：蛋白質電泳、轉膜、檢測。

操作步驟：

蛋白質樣品的制備：

1、再合適的鹽濃度下，應保持蛋白質的最大溶解性和可重復性。

2、選擇合適的表面活性劑和還原劑，破壞所有非共價結合的蛋白質復合物和共價鍵二硫鍵，使其形成一個各自多肽的溶液。

3、盡量去除核酸，多糖，脂類等干擾分子。

4、放置蛋白質在樣品處理過程中認為的修飾，制備過程中應在低溫下進行，以避免破壞細胞破碎釋放出的各種酶類的修飾（建議加入合適的蛋白酶抑制劑）。

5、樣品建議分裝成合適的量，然后冷凍干燥或直接以液體的狀態-80℃中保存，但注意不要反復凍融。
電泳：制備電泳凝膠，進行SDS-PAGE。
轉移：（半干式轉移）
（1）電泳結束后將膠條割至合適大小，用轉膜緩沖液平衡，5min×3次。
（2）膜處理：預先裁好與膠條同樣大小的濾紙和NC膜，浸入轉膜緩沖液中10min。
（3）轉膜：轉膜裝置從下至上依次按陽極碳板、24層濾紙、NC膜、凝膠、24層濾紙、陰極碳板的順序放好，濾紙、凝膠、NC膜精確對齊，每一步去除氣泡，上壓500g重物，將碳板上多余的液體吸干。接通電源,恒流1mA/cm2，轉移1.5hr。轉移結束后，斷開電源將膜取出,割取待測膜條做免疫印跡。

應用：

Western Blot發應用分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中時常會用到的一種實驗方法，并且是一種能對蛋白質進行定性和半定量的分析方法。是通過特異抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色，并且通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中的表達情況的信息。

 

實驗結果：

            

            

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